میکروتوم های پارافین به طور گسترده در آزمایشگاه های بافت شناسی و پاتولوژی برای تهیه مقاطع بافت نازک تعبیه شده در موم پارافین استفاده می شود. ریز شکاف گرفتن با لیزر (LCM) یک تکنیک قدرتمند است که امکان جداسازی سلول‌ها یا جمعیت‌های سلولی خاص از بخش‌های بافتی را برای تجزیه و تحلیل مولکولی بعدی فراهم می‌کند. این سوال مطرح می شود: آیا می توان از میکروتوم پارافینی برای تهیه نمونه میکرودیسکشن با لیزر استفاده کرد؟ در این وبلاگ با در نظر گرفتن قابلیت های میکروتوم های پارافینی و الزامات آماده سازی نمونه LCM این موضوع را به تفصیل بررسی خواهیم کرد.
آشنایی با میکروتوم های پارافین
میکروتوم های پارافین ابزار دقیقی هستند که برای برش برش های نازک بافت پارافینی طراحی شده اند. آنها انواع مختلفی دارند، از جملهمیکروتوم اتوماتیک،میکروتوم نیمه اتوماتیک، ومیکروتوم روتاری. این میکروتوم‌ها ویژگی‌های مختلفی مانند ضخامت برش قابل تنظیم، عمل برش صاف و توانایی رسیدگی به انواع مختلف بافت را ارائه می‌دهند.
اصل اساسی میکروتوم پارافینی شامل پیشبرد بلوک بافت به سمت یک تیغه تیز است که بافت را به بخش های نازک برش می دهد. سپس بخش ها روی یک حمام آب شناور می شوند و برای پردازش بیشتر روی اسلایدهای شیشه ای منتقل می شوند. کیفیت مقاطع به عوامل مختلفی از جمله تیزی تیغه، سرعت برش و جهت گیری مناسب بلوک بافت بستگی دارد.
الزامات برای آماده‌سازی نمونه میکرودیسکشن با لیزر
میکرودیزکسیون گرفتن با لیزر به بخش‌های بافتی با کیفیت بالا نیاز دارد که نازک، مسطح و بدون آرتیفکت باشند. بخش ها باید محکم به لغزنده بچسبند تا از جدا شدن در طول فرآیند LCM جلوگیری شود. علاوه بر این، بافت باید به خوبی حفظ شود تا یکپارچگی اسیدهای نوکلئیک و پروتئین ها برای تجزیه و تحلیل مولکولی پایین دست حفظ شود.
ضخامت ایده آل مقاطع بافت برای LCM معمولا بین 5 تا 10 میکرومتر است. بخش‌های ضخیم‌تر ممکن است تشریح سلول‌های منفرد را دشوار کند، در حالی که بخش‌های نازک‌تر ممکن است بیشتر در معرض آسیب باشند. بخش ها همچنین باید عاری از چین و چروک، چین و سایر مصنوعاتی باشند که می توانند در فرآیند LCM اختلال ایجاد کنند.
آیا می توان از میکروتوم پارافین برای آماده سازی نمونه LCM استفاده کرد؟
پاسخ این است که بله، می توان از میکروتوم پارافین برای آماده سازی نمونه LCM استفاده کرد. با این حال، برای اطمینان از کیفیت بخش ها و موفقیت روش LCM باید چندین ملاحظات در نظر گرفته شود.
1. انتخاب تیغه
انتخاب تیغه برای به دست آوردن مقاطع بافتی با کیفیت بسیار مهم است. یک تیغه تیز و تمیز برای اطمینان از برش صاف و به حداقل رساندن آسیب بافت ضروری است. برای آماده سازی نمونه LCM، توصیه می شود از تیغه یکبار مصرف با کیفیت بالا که به طور خاص برای برش پارافین طراحی شده است، استفاده کنید. این تیغه ها معمولاً از فولاد ضد زنگ یا کاربید تنگستن ساخته می شوند و دارای لبه برش تیز هستند که می تواند بخش های نازک و یکنواختی ایجاد کند.
2. ضخامت برش
همانطور که قبلا ذکر شد، ضخامت ایده آل مقاطع بافت برای LCM بین 5 تا 10 میکرومتر است. اکثر میکروتوم‌های پارافینی امکان تنظیم ضخامت برش را فراهم می‌کنند که می‌توان آن را با توجه به الزامات خاص روش LCM تنظیم کرد. مهم است که اطمینان حاصل شود که ضخامت برش در طول فرآیند برش برای به دست آوردن مقاطع یکنواخت ثابت است.
3. جهت بافت
جهت گیری مناسب بافت برای LCM دقیق ضروری است. جهت گیری بلوک بافتی باید به گونه ای باشد که سلول های مورد نظر به راحتی برای تشریح در دسترس باشند. این ممکن است مستلزم برش دقیق بلوک بافت و قرارگیری مناسب روی چاک میکروتوم باشد.
4. چسبندگی بخش
برای جلوگیری از جدا شدن بخش های بافت در طول فرآیند LCM، مهم است که اطمینان حاصل شود که بخش ها به طور محکم به لام چسبیده اند. این را می توان با استفاده از یک پوشش اسلاید یا چسب مناسب به دست آورد. برخی از پوشش‌های اسلاید که معمولاً مورد استفاده قرار می‌گیرند عبارتند از پلی ال لیزین، سیلان و ژلاتین. این پوشش‌ها به بهبود چسبندگی بخش‌های بافت به لام کمک می‌کنند و از شناور شدن آنها در طول روش LCM جلوگیری می‌کنند.
5. کیفیت بخش
کیفیت بخش های بافت برای موفقیت روش LCM بسیار مهم است. بخش ها باید نازک، صاف و عاری از آثاری مانند چین و چروک، چین و پارگی باشند. برای دستیابی به مقاطع با کیفیت بالا، پیروی از تکنیک های مناسب برش، از جمله استفاده از تیغه تیز، تنظیم سرعت برش و حفظ ضخامت برش ثابت، مهم است.
مزایای استفاده از میکروتوم پارافین برای تهیه نمونه LCM
استفاده از میکروتوم پارافین برای آماده سازی نمونه LCM چندین مزیت دارد:
1. سازگاری
میکروتوم های پارافین به طور گسترده ای در آزمایشگاه های بافت شناسی و پاتولوژی استفاده می شود و اکثر آزمایشگاه ها از قبل به این ابزار مجهز شده اند. این امر ادغام آماده سازی نمونه LCM را در جریان کار آزمایشگاهی موجود آسان می کند.
2. مقرون به صرفه
میکروتوم های پارافینی در مقایسه با انواع دیگر میکروتوم ها مانند میکروتوم های کرایوستات نسبتاً ارزان هستند. این آنها را به گزینه ای مقرون به صرفه برای آزمایشگاه هایی با بودجه محدود تبدیل می کند.
3. تطبیق پذیری
میکروتوم های پارافینی را می توان برای برش طیف وسیعی از انواع بافت از جمله بافت های سخت و نرم استفاده کرد. این باعث می شود آنها برای انواع کاربردهای LCM از جمله تحقیقات سرطان، علوم اعصاب و زیست شناسی رشدی مناسب باشند.
محدودیت‌های استفاده از میکروتوم پارافین برای آماده‌سازی نمونه LCM
در حالی که میکروتوم های پارافین را می توان برای آماده سازی نمونه LCM استفاده کرد، آنها همچنین محدودیت هایی دارند:
1. حفظ بافت
تعبیه پارافین شامل استفاده از دماهای بالا و حلال‌های آلی است که می‌تواند باعث درجاتی از آسیب و تخریب بافت شود. این ممکن است بر کیفیت اسیدهای نوکلئیک و پروتئین ها در بخش های بافت تأثیر بگذارد و آنها را برای تجزیه و تحلیل مولکولی پایین دست مناسب تر کند.
2. ضخامت بخش
ضخامت برش میکروتوم های پارافینی معمولاً به حداقل 2-3 میکرومتر محدود می شود. این ممکن است برای برخی از کاربردهای LCM به اندازه کافی نازک نباشد، به ویژه آنهایی که نیاز به جداسازی سلول های منفرد یا جمعیت های سلولی کوچک دارند.
3. بخش بندی مصنوعات
برش پارافین گاهی اوقات می تواند منجر به آثاری مانند چین و چروک، چین و پارگی شود که می تواند در فرآیند LCM اختلال ایجاد کند. از بین بردن این مصنوعات می تواند دشوار باشد، به خصوص هنگام کار با بافت های ظریف یا فیبری.
نتیجه گیری
در نتیجه، می توان از میکروتوم پارافینی برای تهیه نمونه میکرودیسکشن با لیزر استفاده کرد. با این حال، برای اطمینان از کیفیت بخش ها و موفقیت روش LCM باید چندین ملاحظات در نظر گرفته شود. با انتخاب تیغه مناسب، تنظیم ضخامت برش، جهت گیری مناسب بافت، اطمینان از چسبندگی مقطع و حفظ کیفیت بالای مقطع، می توان مقاطع بافتی با کیفیت بالا و مناسب برای LCM به دست آورد. در حالی که میکروتوم های پارافین دارای محدودیت هایی هستند، آنها چندین مزیت از جمله سازگاری، مقرون به صرفه بودن و تطبیق پذیری را ارائه می دهند.
اگر علاقه مند به خرید میکروتوم پارافین برای آماده سازی نمونه LCM هستید یا در مورد محصولات ما سؤالی دارید، لطفاً برای اطلاعات بیشتر و بحث در مورد نیازهای خاص خود با ما تماس بگیرید. ما متعهد به ارائه میکروتوم های با کیفیت بالا و خدمات عالی به مشتریان برای رفع نیازهای شما هستیم.
مراجع
- Emert-Buck، MR، Bonner، RF، Smith، PD، Chuaqui، RF، Zhuang، Z.، Goldstein، SR، ... و Liotta، LA (1996). میکرودیسکشن گرفتن با لیزر علم، 274(5289)، 998-1001.
- سوارز-کویان، کالیفرنیا، و بونر، RF (2000). میکرودیسکشن گرفتن با لیزر: اصول و کاربردهای اساسی روش ها در زیست شناسی سلولی، 61، 3-23.
- Mirlacher, M., & Speicher, MR (2001). جداسازی لیزری: ابزاری قدرتمند برای تجزیه و تحلیل مولکولی جمعیت‌های سلولی منتخب. هیستوشیمی و زیست شناسی سلولی، 115 (4)، 299-306.